Le prochain midi du club aura lieu le mardi 10 décembre 2024 à 12h30 ! La présentation sera effectuée par Zahia Bouchelaghem, en thèse à l’Université d’Orléans (Institut de Chimie organique et analytique)
Sa présentation s’intitule : « Effet de l’encombrement stérique sur la hyaluronidase : approches par électrophorèse capillaire et thermophorèse à micro-échelle »
La matrice extracellulaire (MEC), composée d’une grande variété de macromolécules, forme un réseau moléculaire important et un gel hydraté1. Elle est constamment régénérée, remodelée et dégradée pour maintenir l’homéostasie tissulaire, grâce à l’action d’enzymes telles que la collagénase, la hyaluronidase (Hyal) et l’élastase2. Le but de ce projet est de mimer cet espace afin d’évaluer l’effet de l’encombrement stérique sur l’activité catalytique de ces enzymes ainsi que leur interaction avec les composés du milieu.
Dans cette présentation, la Hyal sera étudiée. Elle catalyse l’hydrolyse de l’acide hyaluronique (HA), un polysaccharide de grande taille, responsable de la lubrification des cartilages et de la peau3. L’encombrement est induit en ajoutant dans le milieu le dextrane (Dex) à différents poids moléculaires, 30 et 345 kDa. L’électrophorèse capillaire (CE-UV) est utilisée pour séparer et quantifier les différents produits de dégradation de l’HA, en absence et en présence de certains inhibiteurs. La thermophorèse à micro-échelle (MST) quant à elle permet les études d’affinité entre la Hyal et le dextrane4. La méthode d’injection en CE-UV a été optimisée en tenant compte de la viscosité et de la complexité du milieu. Des études cinétiques ont aussi été réalisées en utilisant un petit substrat, le décamer, afin de mieux comprendre l’effet du Dex sur l’activité de la Hyal et de mettre en place des modèles théoriques. Pour les études d’affinité par MST, le marquage par fluorescence de la Hyal a été optimisé ainsi que le tampon d’analyse.
Les résultats obtenus démontrent l’intérêt indéniable de réaliser les études enzymatiques dans des conditions le plus proche possible de celles in vivo, ainsi que l’efficacité et la sensibilité de l’électrophorèse capillaire dans ce types d’études.
References
(1) Theocharis, A. D. et al., Extracellular Matrix Structure. Adv Drug Delivery Rev. 2016, 97, 4–27.
(2) Chantrain, C.; DeClerck, Y. A. Les métalloprotéases matricielles et leurs inhibiteurs synthétiques dans la progression tumorale. médecine/sciences 2002, 18 (5), 565–575.
(3) Fayad, S. et al., Hyaluronidase Reaction Kinetics Evaluated by Capillary Electrophoresis with UV and High-Resolution Mass Spectrometry Detection. Anal. Chim. Acta 2017, 951, 140–150.
(4) Nasreddine, R.; Nehmé, R. Microscale Thermophoresis for Studying Protein-Small Molecule Affinity: Application to Hyaluronidase. Microchem. J. 2021, 170, 106763.
Si vous voulez participer à ce midi du club jeunes mais que vous n’avez pas reçu le lien, n’hésitez pas à nous envoyer un mail à cj_afsep@outlook.fr
N’hésitez pas également à faire passer le message dans vos laboratoires respectifs. Pour rappel, ces midis du Club Jeunes sont ouverts à tous, et permettent aux jeunes de présenter leurs travaux de recherche. Également, si des doctorants ou post-doctorants sont intéressés par effectuer une présentation, n’hésitez pas à nous contacter.
Le bureau du Club Jeunes de l’AfSep